甲氨蝶呤不适合与磺胺类药物一起吃，可能会引起甲氨蝶呤血清浓度的增高而导致毒性反应的出现。氨苯喋啶、乙胺嘧啶等药物均有抗叶酸作用，如与MTX同用可增加其毒副作用。

甲氨蝶呤不能与以下几类药一起吃：1、还能与乙醇和其他对肝脏有损害药物同用，可增加肝脏的毒性;2、不能与保泰松和磺胺类药物同用，因与蛋白质结合的竞争，可能会引起甲氨蝶呤片血清浓度的增高而导致毒性反应的出现。3、不能抗凝药慎同用，甲氨蝶呤片可增加抗血凝作用，甚至引起肝脏凝血因子的缺少或(和)血小板减少症。